Morphology and Biochemistry of Ovulation Morfologia e bioquímica da ovulação

Abstract The process of ovulation involves multiple and iterrelated genetic, biochemical, and morphological events: cessation of the proliferation of granulosa cells, resumption of oocyte meiosis, expansion of cumulus cell-oocyte complexes, digestion of the follicle wall, and extrusion of the metaphase-II oocyte. The present narrative review examines these interrelated steps in detail. The combined or isolated roles of the folliclestimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH) are highlighted. Genes indiced by the FSH genes are relevant in the cumulus expansion, and LH-induced genes are critical for the resumption ofmeiosis and digestion of the follicle wall. A nonhuman model for follicle-wall digestion and oocyte release was provided.

Resumo O processo de ovulação envolve modificações genéticas, bioquímicas e morfológicas múltiplas e interrelacionadas: suspensão da proliferação das células da granulosa, reinício da meiose do oócito, expansão das células do complexo cumulus-oócito, digestão da parede folicular, e extrusão do oócito. Esta revisão narrativa examina em detalhes cada um desses eventos e os principais genes e proteínas envolvidos. Mais importante, a ação combinada ou isolada do hormônio folículo-estimulante (HFE) e do hormônio luteinizante (HL) é destacada. Detalha-se o papel do HFE na expansão do cumulus e do HL na digestão da parede folicular, permitindo a extrusão do oócito na superfície ovariana. Proveu-se um modelo não humano para explicar a digestão da parede folicular.

Insulin effect during a Heatsynch protocol in dairy cows / Efeito da insulina durante um protocolo Heatsynch em vacas leiteiras

ABSTRACT: The objective of this study was to evaluate the effect of exogenous insulin administration on follicular growth, estrus presentation and conception rate during a protocol of ovulation synchronization. Dairy cows were subjected to the Heatsynch protocol, with the insertion of an intravaginal device containing 1.9 g of progesterone (CIDR) and an intramuscular injection containing 2.5 mg of GnRH on day 0. On day 7, the CIDR was removed and subjects were given 12.5 mg of dinoprost. Also on day 7, Insulin Group (IG, n = 21) animals received a subcutaneous injection containing 0.25 IU / kg of recombinant human insulin and the control group (CG, n = 25) received a 0.9% NaCl injection. On day 8, an injection of 0.5 mg of estradiol cypionate was administered to all cows. Animals were inseminated 12 hours after estrus presentation or at day 10 at fixed time. Follicular development was evaluated on days 7, 9, and 10 using transrectal ultrasonography, estrus presentation was observed between days 8 and 10, and conception rate was evaluated 30 days after AI. There were no differences in growth rate, follicular diameter, estrus presentation, and conception rate. Therefore, application of a single dose of insulin does not promoted an increase in follicular size, estrus presentation and conception rate in dairy cows.

RESUMO: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da administração exógena de insulina sobre crescimento folicular, apresentação de cio e taxa de concepção durante um protocolo de sincronização da ovulação. As vacas holandês lactantes foram submetidas ao protocolo Heatsynch, com inserção do dispositivo intravaginal contendo 1,9 g de progesterona (CIDR) no dia 0 e uma injeção intramuscular de 2,5 mg de GnRH. No dia 7, o CIDR foi removido e foi aplicado 12,5 mg de dinoprost. Ainda no dia 7, os animais do Grupo Insulina (IG, n = 21) receberam uma injeção subcutânea de 0,25 UI / kg de insulina humana recombinante e o grupo controle (CG, n = 25) recebeu uma injeção de NaCl 0,9%. No dia 8 foi aplicado 0,5 mg de cipionato de estradiol em todas as vacas. Animais foram inseminados 12 horas após a apresentação de cio ou no dia 10 em tempo fixo. O desenvolvimento folicular foi avaliado nos dias 7, 9 e 10 por ultrassonografia transretal, a apresentação de cio foi observada entre os dias 8 e 10 e a taxa de prenhez/IA foi avaliada 30 dias após a IA. Não houve diferença quanto a taxa de crescimento e diâmetro folicular, apresentação de cio e taxa de concepção. A aplicação de uma dose única de insulina não promove o incremento no tamanho folicular, apresentação de cio e taxa de prenhez/IA em vacas de leite.

Estudo da vascularização folicular e do corpo lúteo de éguas cíclicas tratadas com extrato de pituitária equina utilizando ultrassom Doppler colorido / Study of follicular and corpus luteum vascularization in mares treated with Equine Pituitary Extract using ultrasound color Doppler

Informações sobre a vascularização da parede folicular e do corpo lúteo equino, associadas à superovulação, são escassas. Com o objetivo de avaliar o efeito superovulatório do extrato de pituitária equina (EPE) no fluxo sanguíneo folicular e luteal, foram utilizadas seis éguas Puro Sangue Árabe, em dois ciclos estrais (controle e tratamento). As éguas foram monitoradas diariamente por ultrassonografia modo B, até que os folículos atingissem diâmetro de 23mm (desvio). No ciclo tratamento, as éguas receberam 8mg de EPE, uma vez ao dia, por via IM, até que dois ou mais folículos atingissem o diâmetro entre 32 e 35mm. A ovulação foi induzida com acetato de deslorelina, quando os folículos atingiram, no mínimo, 35mm. No momento do desvio folicular, da indução da ovulação e do último exame pré-ovulatório, foi utilizada a ultrassonografia modo B para medir o diâmetro dos folículos e, no oitavo dia pós-ovulação, para a área do corpo lúteo (CL). Utilizou-se também ultrassonografia com Doppler colorido para avaliar a perfusão sanguínea da parede folicular e do parênquima luteal. No ciclo controle, foi realizado o mesmo procedimento, exceto pelo uso do EPE. Os dados foram submetidos à análise de variância, com nível de significância de 5%. Não foi observado efeito do EPE sobre o número de ovulações, o diâmetro dos folículos, a vascularização da parede folicular e a concentração sérica de estrógeno. Os animais, tratados ou não, apresentaram CLs funcionais, não havendo diferença na área do parênquima ou da vascularização luteal, nem na concentração sérica de progesterona, no oitavo dia após a ovulação. Foi observado que o EPE proporcionou um maior número de folículos subordinados no momento da indução da ovulação do folículo dominante (P ≤ 0,05). Embora esses folículos não tenham chegado a ovular, concluiu-se que o EPE atuou no crescimento de folículos, que podem ser utilizados em outras biotécnicas, como a transferência de oócitos, com maior aproveitamento da reserva folicular de ovários equinos.(AU)

Knowledge about follicle and corpus luteum vascularization associated with superovulation in mares is scarce. Aiming to evaluate the effect of equine pituitary extract (EPE) on superovulation, the experiment was conducted using six mares Purebred Arabian in two estrous cycles (control and treatment). The mares were synchronized, and monitored daily by ultrasound B mode until the follicles reached diameter ≤ 23 mm (deviation). In the treatment cycle, from the deviation, mares received 8 mg of EPE, once a day, intramuscularly, until two or more follicles reached a diameter between 32 and 35 mm. Ovulation was induced with deslorelin acetate when follicles reached at least 35 mm. At the time of follicular deviation, induction of ovulation and final preovulatory exam, it was used B-mode ultrasound to measure the diameter of follicles and on the eighth day after ovulation to measure the area of the corpus luteum (CL); color Doppler was also used to assess blood perfusion of the follicle wall and luteal parenchyma. In the control cycle was performed the same procedure except for the use of EPE. Data were subjected to analysis of variance, with 5% significance level. There was no effect of EPE on ovulation number, diameter of follicles, vascularity of the follicular wall and serum estrogen concentration. The animals treated or not, showed functional CLs, with no difference in parenchymal area or luteal vascularization, or in serum progesterone concentration on the eighth day after ovulation. It was observed that the EPE provided a greater number of subordinate follicles at the time of induction of ovulation of the dominant follicle. Although these follicles have failed to ovulate, it was concluded that EPE influenced the follicles growth, and it can be used in other biotechnologies, with greater utilization of equine ovarian follicular reserve.(AU)

How polymorphic markers contribute to genetic diseases in different populations? The study of inhibin A for premature ovarian insufficiency / Como os marcadores polimórficos contribuem para as doenças genéticas em diferentes populações? O estudo da inibina A para insuficiência ovariana prematura

ABSTRACT Objective To verify the incidence of the G679A mutation in exon 2 of the gene inhibin alpha (INHA), in women with secondary amenorrhea and diagnosis of premature ovarian insufficiency, and in controls. Methods A 5mL sample of peripheral blood was collected from all study participants in an EDTA tube and was used for DNA extraction. For the patient group, 5mL of blood were also collected in a tube containing heparin for karyotype, and 5mL were collected in a dry tube for follicle stimulant hormone dosage. All patient and control samples were initially submitted to analysis of the G679A variant in exon 2 of the INHA gene by PCR-RFLP technique. Samples from patients with premature ovarian insufficiency after PCR-RFLP were submitted to Sanger sequencing of the encoding exons 2 and 3. Sequencing was performed on ABI 3500 GeneticAnalyzer equipment and the results were evaluated by SeqA and Variant Reporter software. Results Samples of 70 women with premature ovarian insufficiency and 97 fertile controls were evaluated. The G769A variant was found in only one patient in the Premature Ovarian Insufficiency Group and in no control, and it appears to be rare in Brazilian patients with premature ovarian insufficiency. This polymorphism was previously associated to premature ovarian insufficiency in several populations worldwide. Conclusion There is genetic heterogeneity regarding the INHA gene in different populations, and among the causes of premature ovarian insufficiency.

RESUMO Objetivo Verificar a incidência da mutação G679A no éxon 2 do gene da inibina alfa (INHA) em mulheres com amenorreia secundária e diagnóstico de insuficiência ovariana prematura e em controles. Métodos Uma amostra de 5mL de sangue periférico foi coletada de todos os participantes do estudo em tubo de EDTA e utilizada para a extração de DNA. Para o grupo de pacientes, foram coletados também 5mL de sangue em tubo contendo heparina para realização de cariótipo, e 5mL um tubo seco para dosagem de hormônio folículo-estimulante. As amostras de pacientes e controles foram inicialmente submetidas à análise da variante G679A no éxon 2 do gene INHA pela técnica de PCR-RFLP. As amostras de pacientes com insuficiência ovariana prematura após PCR-RFLP foram submetidas ao sequenciamento de Sanger dos éxons codantes 2 e 3. O sequenciamento foi realizado em equipamento ABI 3500 GeneticAnalyzer, e os resultados foram avaliados pelos programas SeqA and Variant Reporter. Resultados Foram avaliadas amostras de 70 mulheres com insuficiência ovariana prematura e de 97 controles férteis. A variante G769A foi encontrada em apenas uma paciente do Grupo Insuficiência Ovariana Prematura e em nenhum controle, e parece ser rara nas pacientes brasileiras com insuficiência ovariana prematura. Este polimorfismo foi previamente associado à insuficiência ovariana prematura em diversas populações no mundo. Conclusão O estudo evidenciou que há heterogeneidade genética quanto ao INHA em diferentes populações e entre as causas de insuficiência ovariana prematura.

Variabilidade da contagem automática tridimensional de folículos ovarianos durante o ciclo menstrual / Variability of Three-dimensional Automatic Ovarian Follicle Count in Menstrual Cycle

Objetivos Avaliar a variabilidade da contagem automática tridimensional dos folículos ovarianos que mediram 2 a 6 mm e 2 a 10 mm durante o ciclo menstrual. Verificar se este exame pode ser aplicado fora da fase folicular precoce do ciclo. Método Prospectivo observacional. Foram incluídas todas as pacientes inférteis submetidas à monitorização da ovulação de 20 de abril de 2013 a 30 de outubro de 2014, com18 a 35 anos; IMC de 18 a 25 kg/m2, eumenorréicas; semhistória de cirurgia ovariana e sem alterações nas dosagens do TSH, prolactina, insulina e glicemia. Foram excluídas aquelas que apresentaram cistos ovarianos e as que faltaram algum dia da monitorização. A contagem ultrassonográfica dos folículos foi feita pelo modo 3D com Sono AVC na fase folicular precoce, folicular media, periovulatória e lútea do ciclo. Resultados Quarenta e cinco mulheres foram incluídas. Houve diferença entre as médias das contagens dos folículos com 2 a 6 mm (p = 0,001) e 2 a 10 mm (p = 0,003) pelo teste de Friedman que avaliou conjuntamente as quatro fases do ciclo. Quando se aplicou o teste t-Student pareado, houve aumento significativo na contagem dos folículos de 2 a 6 mm quando se comparou a contagem desses folículos na fase folicular média e periovulatória com a contagem da fase lútea. Não houve diferença significante entre a contagem destes folículos pequenos nas fases folicular precoce, média e periovulatória. Conclusões A variação da contagem automática tridimensional dos folículos de 2 a 6 mm, nas fases folicular precoce, folicular média e periovulatória, não mostrou significância estatística. Houve uma variação significativa da contagem automática 3D dos folículos ovarianos de 2 a 10 mmdurante o ciclo. A variabilidade significativa da contagem dos folículos de 2 a 10 mm durante o ciclo não permite que este exame seja realizado fora da fase folicular precoce.

Objective To evaluate the variability of three-dimensional automatic counts of ovarian follicles measuring 2-6 to 2-10 mm during the menstrual cycle and to determine if this test can be applied outside the early follicular phase of the menstrual cycle. Methods in a prospective observational study, serial transvaginal ultrasound scans were performed from April 20, 2013, to October 30, 2014, on infertile patients. Inclusion criteria: age between 18 and 35 years, BMI 18-25 kg/m2, regular menstrual cycles, no history of ovarian surgery and no hormonal changes in TSH, prolactin, fasting insulin or glucose. We excluded patients with ovarian cysts or who did not complete one or more days of the serial transvaginal ultrasound scans. The follicle count was performed in 3D mode ultrasound with a Sono AVC system. Visits were scheduled for the early follicular, mid-follicular, periovulatory and luteal phases of the menstrual cycle. Results Forty-five women were included. The Friedman test showed that the total number of follicles measuring 2-6 mmvaried significantly (p = 0.001) across the four periods of the menstrual cycle. The Paired Student t-test showed a significant increase in 2-6 mm follicle count from the mid-follicular and periovulatory phase to the luteal phase. We found no significant intra-cycle variation between the small follicles (2-6 mm) in the early follicular, mid-follicular and periovulatory phases. The Friedman test showed that the total number of follicles measuring 2-10 mm varied significantly (p = 0.003) across the menstrual cycle. Conclusions The variation of three-dimensional automatic counts of 2-6 mm follicles in the early follicular, mid-follicular and periovulatory phases was not statistically significant. The significant variability in the counts of follicles measuring 2-10 mm across the menstrual cycle does not permit this examination to be performed side the early follicular phase.

Papel da homeopatia na regulação da foliculogênese in vivo e in vitro / Role of homeopathy in vivo and in vitro regulation of folliculogenesis

A homeopatia apresenta­se como uma excelente opção de baixo custo e toxicidade para uso na prática da reprodução tanto humana quanto animal. Entretanto, desperta um alto nível de ceticismo em relação a sua real eficácia, notadamente devido ao possível efeito placebo. O uso de modelos in vitro, como a tecnologia do ovário artificial, apresenta­se como uma ferramenta de grande precisão para dirimir tal controvérsia. Diante disso, esta revisão tem como objetivo fornecer algumas bases sobre a foliculogênese e sua regulação, relatar a importância do cultivo in vitro, com ênfase no hormônio folículo estimulante (FSH), na avaliação do papel dos medicamentos homeopáticos no tratamento de distúrbios reprodutivos ovarianos e no seu uso para melhorar as biotécnicas reprodutivas.

The homeopathy is a low­cost and toxicity alternative to using in the human and animal reproduction. However, the effect homeopathy awakens a skepticism about its effectiveness, because of the possible placebo effect. The in vitro models, as artificial ovary, is a excellent tool to resolve this controversy. Therefore, the aim of this review to provide some basis on folliculogenesis and its regulation, to report the importance of in vitro culture, with an emphasis on follicle stimulating hormone (FSH), in assessing the role of homeopathic medicines in treating ovarian reproductive disorders and its use to improve reproductive biotechnologies.

Redução da reserva ovariana em pacientes adultas com dermatomiosite

Objetivo: Avaliar os marcadores de reserva ovariana e anticorpos anti-corpo lúteo (anti-CoL) em pacientes com dermatomiosite (DM). Métodos: Todos as 40 pacientes do sexo feminino com DM, idade entre 18 e 42 anos, foram convidadas a participar. Os critérios de exclusão foram uso de contraceptivos hormonais nos últimos seis meses (n=13), associação de neoplasia (n=3), doenças autoimunes sistêmicas sobrepostas (n=3), gravidez atual (n=2), cirurgia ginecológica (n=1) e não concordância em participar do estudo (n=2). Dezesseis pacientes com DM e 23 controles saudáveis selecionados para participar deste estudo transversal foram avaliados na fase folicular precoce do ciclo menstrual. Anti-CoL IgG (immunoblotting), hormônio folículo estimulante (FSH), estradiol, inibina B, níveis séricos do hormônio anti-mülleriano (HAM) (ELISA) e contagem de folículos antrais (CFA) por ultrassonografia foram determinados. Resultados: Pacientes e controles tiveram média de idade, etnia e classe socioeconômica comparáveis (P > 0,05). A média de idade das pacientes foi de 29,1±4,7 anos e duração da doença de 5,6±3,2 anos. O ciclo menstrual, comorbidade e estilo de vida foram semelhantes em ambos os grupos (P > 0,05). HAM <= 1ng/mL (P=0,027) e número da CFA (P=0,017) foram significativamente reduzidos em pacientes com DM quando comparados ao grupo controle, enquanto que níveis séricos de estradiol (P < 0,001) foram maiores em pacientes com DM. Em contraste, os níveis de FSH no soro e inibina B, volumes de ovários, assim como a frequência de anticorpos anti-CoL foram semelhantes em ambos os grupos. Conclusão: O presente estudo foi o primeiro a identificar a reserva ovariana diminuída em pacientes com DM em idade reprodutiva. Mais estudos são necessários para avaliar os fatores envolvidos no prejuízo da reserva ovariana de pacientes com a miopatia inflamatória.

Objectives: To assess ovarian reserve markers and anti-corpus luteum (anti-CoL) antibodies in dermatomyositis (DM) patients. Methods: All 40 female patients with DM, aged between 18 and 42 years, were invited to participate. Exclusion criteria were hormonal contraceptive use in the last six months (n=13), neoplasia associations (n=3), overlapped systemic autoimmune diseases (n=3), current pregnancy (n=2), gynecological surgery (n=1) and did not agree to participate of this study (n=2). Sixteen DM patients and 23 healthy controls were evaluated at early follicular phase of menstrual cycle were selected to participate in this cross-sectional study. IgG anti-CoL (immunoblotting), follicle stimulating hormone (FSH), estradiol, inhibin B, anti-müllerian hormone (AMH) serum levels (ELISA) and sonographicantral follicle count (AFC) was determined. Results: DM patients and controls had comparable mean age, ethnicity and socioeconomic class (P > 0.05). DM mean age of onset was 29.1±4.7 years and disease duration of 5.6±3.2 years. The menstrual cycles, comorbidity and life style were similar in both groups (P > 0.05). AMH<=1ng/mL (P=0.027) and number of the AFC (P=0.017) were significantly reduced in DM patients when compared to control groups, whereas serum estradiol level (P < 0.001) was higher in DM patients compared to controls. In contrast, serum FSH and inhibin B levels, ovarian volumes, as well as the frequency of anti-CoL antibody were alike in both groups. Conclusions: The present study was the first to identify diminished ovarian reserve in DM patients of reproductive age. Further studies are necessary to assess the idiopathic inflammatory myopathy-related factors involved in the ovarian impairment of patients.

Número de folículos antrais e o sucesso da fertilização in vitro: uma análise multivariada / Number of antral follicles and the success of in vitro fertilization: a multivariate analysis

OBJETIVO: Verificar se a contagem de folículos antrais pode predizer o número de oócitos captados em pacientes submetidas à fertilização in vitro (FIV), bem como correlacioná-la com a idade materna e a taxa de gestação. MÉTODOS: Estudo observacional retrospectivo que incluiu 193 pacientes submetidas a técnicas de reprodução assistida, entre setembro de 2010 e setembro de 2012, em uma Clínica de Reprodução Humana do Sudeste do Brasil. O estudo incluiu mulheres com indicação de FIV e com dosagem de hormônio folículo-estimulante inferior a 10 mUI/mL no terceiro dia do ciclo, sendo excluídas as receptoras de oócitos. As pacientes foram divididas em três grupos de acordo com o número de folículos antrais (até 10, de 11 a 22, maior ou igual a 23 folículos). Para a comparação entre esses três grupos e o grupo das pacientes que engravidaram, foram excluídas as pacientes que não desenvolveram oócitos e as que não tiveram embriões transferidos. Utilizou-se o coeficiente de correlação de Spearman para medir o grau de associação entre as variáveis numéricas e o teste do χ2 para comparar taxa de gravidez e contagem de folículos antrais. Para avaliar a probabilidade de gravidez, utilizou-se a regressão logística multivariada, com nível de significância de 5%. RESULTADOS: A taxa de gestação da amostra foi 35,6%. Observou-se correlação significativa (cs) positiva entre contagem de folículos antrais e número de oócitos aspirados (cs=0,5; p<0,05) e negativa entre contagem de folículos antrais e idade (cs= -0,5; p<0,05). Não houve diferença significativa (p=0,16) na comparação entre os grupos com diferentes números de folículos e o grupo com teste ...

PURPOSE: To determine whether the antral follicle count can predict the number of retrieved oocytes in patients undergoing in vitro fertilization (IVF) and to correlate it with maternal age and pregnancy rate. METHODS: This was a retrospective observational study based on a review of medical records from 193 patients who underwent assisted reproduction techniques between September 2010 and September 2012 in a Clinic for Human Reproduction. The study included women indicated for IVF who had follicle-stimulating hormone levels below 10 mIU/mL on third day of the menstrual cycle, with oocyte recipients being excluded. The patients were divided into three groups according to the number of antral follicle (up to 10 follicles, 11–22 follicles, and 23 or more follicles). To compare these three groups with the group of patients who became pregnant, patients who had not developed oocytes and had not undergone embryo transfer were also excluded. Spearman's correlation coefficient was used to measure the level of association between the numerical variables, and χ2 test was used to compare pregnancy rates with antral follicle count. To assess the likelihood of pregnancy, we used multivariate logistic regression, with the level of significance set at 5%. RESULTS: The pregnancy rate of the sample was 35.6%. There was a positive significant correlation (sc) between antral follicle count and number of retrieved oocytes (sc=0.5; p<0.05) and a negative correlation between antral follicle count and age (sc= -0.5; p<0.05). There was no significant difference (p=0.16) when groups with different numbers of follicles were compared to the positive pregnancy test group; however, a cutoff of 27 antral follicles was observed in multivariate analysis, after which the probability of successful gestation tended to remain constant. CONCLUSIONS: The antral follicle count decreases over the years, is a predictor of the number of retrieved oocytes ...

Confiabilidade da contagem de folículos antrais com o uso de ultrassom bidimensional e tridimensional: uma revisão sistemática / Reliability of antral follicle count using two-dimensional and three-dimensional ultrasound: a systematic review

Objetivo: Fazer uma revisão da literatura sobre a confiabilidade da contagem de folículos antrais ovarianos com o uso da ultrassonografia bidimensional e tridimensional. Método: Foi feita uma revisão sistemática dos trabalhos publicados nos últimos 13 anos que tiveram como objetivo avaliar a variabilidade intra e interobservador da contagem de folículos antrais ovarianos com o uso do ultrassom bidimensional e tridimensional. Esses estudos estavam disponíveis nas bases de dados científicas Medline, Lilacs e Scielo. Os descritores usados nas buscas foram: contagem de folículos antrais, reserva ovariana, cálculo automatizado de volume, ultrassom 3D e Sono AVC. Resultados: Verificou-se a existência de 1.057 artigos publicados. Foram selecionados seis estudos relacionados com variabilidade intra e interobservador da contagem de folículos antrais com o uso de ultrassom bidimensional e tridimensional e que respeitavam os critérios de inclusão estabelecidos. Conclusão: A maioria dos estudos concorda com que com o modo 2D a identificação dos folículos e a medição de seus diâmetros ocorrem de forma manual e subjetiva e permitem uma maior variabilidade interobservador. O pós-processamento com possibilidade de recontagem folicular e a reanálise das imagens contribuem para melhorar a confiabilidade da ultrassonografia 3D, mas aumentam o tempo total do exame.

Objective: To review the literature about the reliability of the antral follicle count using the 2D and 3D ultrasonography. Method: A systematic review of studies published over the last 13 years that aimed to evaluate the intra and interobserver variability of the antral follicle count using the 2D and3D ultrasonography in the databases Medline, Lilacs and Scielo. The keywords used in the search were antral follicle count, ovarian reserve, and automated ultrasound. Results: It was found that there were 1.057 published articles. Of these six studies were related to of intra- and interobserver variability of antral follicle count using 2D and 3D ultrasound that respected the inclusion criteria established. Conclusion: Most studies agreed that the 2D mode provides follicle identification and itsdiameter measures manually and subjectively. It allows a greater variability intra- and interobserver.The post-processing with the possibility of follicular recount and review of theimages helps to improve the reliability of the 3D ultrasound but increases the total time of the exam.

Revisão sistemática da variação da contagem de folículos antrais ovarianos durante o ciclo menstrual / Systematic review of ovarian antral follicle count variation during menstrual cycle

Objetivo: Fazer revisão dos estudos que avaliaram a variação da contagem de folículos antrais ovarianos durante o ciclo menstrual de mulheres eumenorreicas. Método: Foi feita revisão sistemática de trabalhos que tiveram como objetivo avaliar a variação da contagem de folículos antrais ovarianos no ciclo menstrual publicados nos últimos 16 anos e disponíveis nas bases de dados científicas Medline, Lilacs e Scielo. Os descritores de busca foram reserva ovariana, contagem de folículos antrais, ciclo menstrual e variação intraciclo. Resultados: Verificou-se a existência de 920 artigos. Foram selecionados sete publicados de 2002 a 2013. Quatro eram estudos prospectivos, um tratava-se de uma revisão sistemática e dois eram estudos experimentais. Conclusão: A contagem de folículos antrais ovarianos parece não sofrer variação significativa no ciclo menstrual, principalmente quando se medem folículos antrais pequenos (2-6 mm).

Objective: To make a review of studies that assessed the variation in ovarian antral follicle count during menstrual cycle eumenorrheic women. Method: A systematic review of studies that aimed to evaluate the variation of antral follicle count in the menstrual cycle from the last 16 years and that were available in scientific databases Medline, Lilacs and Scielo was performed. The descriptors searched were ovarian reserve, antral follicle count, menstrual cycle and intra-cycle variation. Results: 920 articles were found. From these, four of the 7 studies published in the years 2002 to 2013 were prospective studies, 1 was a systematic review and 2 were experimental studies. Conclusion: The ovarian antral follicle count does not seem to suffer significant variation in the menstrual cycle, especially when measuring small antral follicles (2-6 mm).

Ovogênese e foliculogênese em mamíferos / Oogenesis and folliculogenesis in mammals

Os ovários são órgãos sexuais femininos que tem como principais funções a gametogênese e a esteroidogenese. A gametogênese caracteriza-se pela produção de células reprodutivas femininas ou óvulos e a esteroidogenese pela produção de hormônios esteróides. Em especial nos ruminantes, a formação dos gametas femininos e dos folículos ovarianos é iniciada no período pré-natal. Esta revisão destaca os principais processos morfofisiológicos envolvidos na ovogênese e na foliculogênese. A ovogênese pode ser definida como o conjunto de processos que compreende o desenvolvimento e diferenciação das células germinativas primordiais até a formação do óvulo e sua fecundação. Já a foliculogênese inclui a unidade morfofuncional do ovário que desempenha a função de produção de hormônios esteróides e a de manutenção da viabilidade do óvulo até a ovulação. Com o crescente avanço das biotécnicas de reprodução assistida, a compreensão das funções da ovogênese e foliculogênese é essencial para eficiência reprodutiva dos animais e para obtenção de descendentes viáveis a partir de ovócitos cultivados in vitro.

The ovaries are the female sexual organs whose main functions are the gametogenesis and steroidogenesis. Gametogenesis is characterized by the production of female reproductive cells or ova, and steroidogenesis by the production of steroid hormones. Especially in ruminants, the formation of female gametes and ovarian follicles is initiated in the prenatal period. This review highlights the main morphophysiological processes involved in oogenesis and folliculogenesis. Oogenesis can be defined as the set of processes covering the development and differentiation of primordial germ cells until the formation of the egg and its fertilization. On the other hand, folliculogenesis includes morphofunctional unit of the ovary that serves as the production of steroid hormones and maintenance of the viability of the egg until ovulation. With an increasing breakthrough of biotechnical assisted reproductive functions, understanding of oogenesis and folliculogenesis is essential for reproductive efficiency of animals and for obtaining viable offspring from oocytes cultured in vitro.

Tratamento de folículo anovulatório persistente em égua: relato de caso / Treatment of persistent anovulatory follicle in mare: a case report

O presente estudo busca apresentar o processo diagnóstico, evolução e tratamento, bem como registrar um caso de folículo anovulatório persistente na espécie equina. Para tanto, realizou-se atendimento clínico em uma égua da raça Quarto de Milha de nove anos de idade, no Hospital Veterinário da Universidade Paulista de São José dos Campos, com histórico de infertilidade. Foi realizada a avaliação clínica do paciente e exame ultrassonográfico do sistema reprodutivo, utilizando o equipamento Ultrassom Chison D600 com probe linear 7,5MHz no qual foi identificada estrutura compatível com folículo anovulatório no ovário direito. O tratamento proposto seria a utilização 5000 UI de gonadotropina coriônica humana (hCG - Vetecor - Hertape Calier) por via intravenosa e 250 mg de Cloprostenol (Prolise® -Tecnopec), por via intramuscular, no nono dia após a aplicação do hCG. No entanto por apresentar quadro de desconforto abdominal 24 horas após a aplicação do hCG, o tratamento foi suspenso a pedido do proprietário, não sendo realizada a indução da luteólise. O animal foi reavaliado com novo exame ultrassonográfico após sete dias da aplicação do hCG, onde foram observadas imagens ultrassonográficas compatíveis com a ovulação do folículo. A terapia proposta foi eficiente para resolução do folículo anovulatório, no entanto, a origem do quadro de desconforto abdominal pode ser evidenciada, sugerindo que maiores esforços sejam necessários para investigar o efeito do tratamento na saúde do animal...

This study seeks to make the diagnostic process, evolution and treatment, as well as to register a case of persistent anovulatory follicle in the equine species. Therefore, a mare of the Quarter Horse race of nine-year-old with a history of infertility was examined at the Veterinary Hospital of Universidade Paulista in São José dos Campos. It was performed a clinical assessment of the patient and ultrasound examination of the reproductive system, using ultrasound equipment Chison D600 with 7.5 MHz linear probe. It was identified a structure compatible with anovulatory follicle in the right ovary. The proposed treatment would be to use 5000 IU IV human chorionic gonadotropin (hCG - Vetecor - Hertape Calier) and 250 mg Cloprostenol IM (Prolise® - Tecnopec) on the ninth day after application of hCG. However, the animal showed abdominal discomfort 24 hours after application of hCG, so the treatment was suspended at the request of the owner, has not been accomplished to induce luteolysis. The animal was reassessed with new ultrasound seven days after application of hCG, which were seen ultrasound images compatible with ovulation follicle. The proposed therapy was effective for solving the anovulatory follicle, however, it was evident abdominal discomfort, suggesting that further efforts are necessary to investigate the treatment effect on the health of the animal...

A contagem dos folículos antrais na predicão de resultados em ciclos de fertilizacão in vitro: uma revisão sistemática / Antral follicle count in the prediction of in vitro fertilization cycles results: A systematic review

Objetivo: Revisar a capacidade da contagem dos folículos antrais de predizer resultados nos ciclos de fertilização in vitro. Método: Foi feita revisão sistemática de trabalhos publicados nos últimos 13 anos que tiveram como objetivo determinar a capacidade da contagem dos folículos antrais de predizer resultados nos ciclos de fertilização in vitro. Esses estudos estavam disponíveis nas bases de dados científicas Medline, Lilacs e Scielo. Os descritores de busca foram contagem de folículos antrais, reserva ovariana e fertilização in vitro. Resultados: Verificou-se a existência de 975 artigos publicados. Foram selecionados 16 deles publicados de 2000 a 2013 que mostraram a importância de a contagem dos folículos antrais predizer resultados nos ciclos de fertilização in vitro em pacientes em idade fértil, sem história prévia de cirurgia ovariana, não fumantes e submetidas ao primeiro ciclo de fertilização in vitro. Conclusão: Grande parte dos estudos mostrou que a contagem de poucos folículos antrais está associada com a ocorrência de má resposta ovariana e maior chance de cancelamento dos ciclos de fertilização in vitro, assim como com uma baixa quantidade de oócitos aspirados. Ainda não há um método ideal para predizer gravidez de forma confiável.

Objective: To review the ability of the antral follicle count in the prediction of in vitro fertilization cycles outcomes. Method: A systematic review of studies published in the last 13 years that aimed to determine the ability of the antral follicle count to predict outcome in IVF cycles was done. These studies were available in the scientific databases MEDLINE, LILACS and Scielo. The keywords were the antral follicle count, ovarian reserve and in vitro fertilization. Results: During the search it was found that there were 975 published articles. We selected 16 articles published between the years of 2000 to 2013 that showed the importance of the antral follicle count to predict in vitro fertilization cycles outcomes in patients of childbearing age, with no history of ovarian surgery, non-smokers and undergoing the first in vitro fertilization cycle. Conclusion: Most studies show that few antral follicle counts is associated with the occurrence of poor ovarian response and greater chance of canceling cycles of in vitro fertilization cycles, as well as a low amount of collected oocytes. There is still no ideal method for predicting pregnancy reliably.

Morfologia das células intersticiais de ovários policísticos de ratas: um estudo experimental / Morphology of the interstitial cells of rat polycystic ovaries: an experimental study

OBJETIVOS: Avaliar a histomorfometria das células intersticiais dos ovários, bem como analisar a concentração sanguínea de esteroides sexuais de ratas portadoras de ovários policísticos induzidos pela luz contínua. MÉTODOS: Vinte ratas foram divididas em dois grupos: ratas na fase de estro (GCtrl ) e ratas portadoras de ovários policísticos induzidos pela iluminação contínua (GOP). Os animais do GCtrl permaneceram com período de luz das 7:00 s 19:00 horas, e os animais do GOP, com iluminação contínua (400 Lux), durante um período de 60 dias. Ao final desse período todos os animais foram anestesiados, foi coletado o sangue, para determinação dos níveis séricos de estradiol (E2), progesterona (P4) e testosterona (T), seguido da retirada dos ovários que foram fixados em formol a 10% e processados para inclusão em parafina. Cortes histológicos com 5 µm corados pela hematoxilina e eosina foram utilizados para análise histomorfométrica. As análises morfológicas, contagem de cistos, determinação da concentração e do volume nuclear das células intersticiais foram realizadas com o auxílio de microscópio de luz adaptado a uma câmera de alta resolução (AxioCam), cujas imagens foram transmitidas e analisadas em computador com software AxioVision Rel 4.8 (Carl Zeiss). Os dados obtidos foram submetidos ao teste t de Student (p<0,05). RESULTADOS: A morfologia mostrou a presença de cistos nos ovários pertencentes ao Grupo OP e de corpos lúteos no GCtrl, mostrando ainda evidências da origem das células intersticiais a partir das células da teca interna desses cistos. Com relação aos níveis hormonais o GOP apresentou níveis séricos de estradiol (pg/mL) aumentados em relação ao GCtrl (GOP=124,9±4,2>GCtrl=73,2±6,5; p<0,05), o mesmo ocorrendo com os níveis de testosterona (pg/mL) (GOP=116,9±4,6>GCtrl=80,6±3,9; p<0,05). Entretanto os níveis de progesterona (ng/mL) foram mais elevados no GCtrl em relação ao GOP (GCtrl=16,3±2,0>GOP=4,2±1,5; p<0,05). A morfometria mostrou haver aumento significante do volume nuclear no grupo GOP (GOP=102,1±5,2>GCtrl=63,6±16,5; p<0,05), assim como da área ocupada (%) pelas células intersticiais (GOP=24,4±6,9>GCtrl=6,9±3,2; p<0,05) em relação aos animais do GCtrl. CONCLUSÃO: As células intersticiais do ovário policístico da rata provavelmente provêm dos cistos ovarianos devido degeneração das células da granulosa e diferenciação das células da teca interna. As elevações dos níveis séricos de testosterona e de estradiol provavelmente provêm do aumento significativo da atividade celular e da área ocupada pelas células intersticiais.

PURPOSES: To evaluate the histomorphometry of ovarian interstitial cells, as well as the blood sex steroid concentrations of female rats with polycystic ovaries induced by continuous light. METHODS: Twenty female rats were divided into two groups: Control Group - in the estrous phase (CtrlG), and a group of rats with polycystic ovaries induced by continuous illumination (POG). CtrlG animals were maintained on a light period from 07:00 a.m. to 07:00 p.m., and POG animals with continuous illumination (400 Lux) for 60 days. After this period all animals were anesthetized and blood was collected for the determination of serum estradiol (E2), progesterone (P4), and testosterone (T), followed by removal of the ovaries that were fixed in 10% formalin and processed for paraffin embedding. Five-µm histological sections were stained with hematoxylin and eosin and used for histomorphometric analysis. Morphological analyses, cyst count, determination of concentration and of the nuclear volume of interstitial cells were performed with the aid of a light microscope adapted to a high resolution camera (AxioCam), whose images were transmitted to and analyzed by the computer using AxioVision Rel 4.8 software (Carl Zeiss). Data were analyzed statistically by the Student's t-test (p<0.05). RESULTS: Morphological analysis showed the presence of ovarian cysts in POG animals and corpora lutea in CtrlG animals, as well as evidence of the origin of interstitial cells from the internal theca of these cysts. POG animals presented increased serum estradiol levels (pg/mL) compared to CtrlG animals (POG=124.9±4.2>CtrlG=73.2±6.5, p<0.05), the same occurring with testosterone levels (pg/mL) (POG=116.9±4.6>CtrlG=80.6±3.9, p<0.05). However, progesterone levels (ng/mL) were higher in CtrlG than in POG animals (CtrlG=16.3±2.0>POG=4.2±1.5, p<0.05). Morphometry showed a significant increase in nuclear volume in POG animals (POG=102.1±5.2>CtrlG=63.6±16.5, p<0.05), as well as in the area occupied (%) by interstitial cells (POG=24.4±6.9>CtrlG=6.9±3.2, p<0.05) compared to CtrlG animals. CONCLUSION: The interstitial cells of the rat polycystic ovary probably originate from ovarian cysts due to the degeneration of granulosa cells and differentiation of the internal theca cells. The elevations of serum testosterone and estradiol were probably due to the significant increase in cell activity and in the area occupied by interstitial cells.

Correlação entre a idade e a contagem dos folículos antrais em mulheres inférteis / Correlation between age and antral follicles count in infertile women

OBJETIVO: Construir um nomograma correlacionando a idade com diferentes valores dos percentis da contagem dos folículos antrais (CFA) em mulheres inférteis. MÉTODOS: Foi feito um estudo transversal de todas as pacientes atendidas, no centro de reprodução assistida Fêmina, no período de 1º de março de 2010 a 1º de outubro de 2011. As pacientes foram submetidas à ultrassonografia transvaginal do 2º ao 4º dias de seu ciclo menstrual. Foram incluídas as pacientes de 21 a 45 anos, com ciclos regulares, dois ovários íntegros, sem evidência de endocrinopatias e que assinaram o consentimento. Foram excluídas as tabagistas, portadoras de galactosemia, cistos ovarianos, com antecedente de hepatopatia, cirurgia ginecológico-ovariana e tratamento com quimioterapia ou radioterapia. Com o intuito de se verificar a correlação da CFA com a idade das pacientes, foram utilizados os percentis 5, 25, 50, 75 e 95. Com o uso dos percentis foi feita uma regressão linear que possibilitasse perceber o efeito da idade sobre a CFA. Foi utilizado como nível de significância o valor de 5% (p<0,05). RESULTADOS: Cento e setenta e duas pacientes foram incluídas no estudo e a média de idade foi de 32,7 anos. Dentre as causas de infertilidade, os fatores masculino e tubário foram as principais etiologias, contribuindo com 65% dos casos. O nomograma correlacionando a idade com os percentis 5, 25, 50, 75 e 95 da CFA foi melhor ajustado por uma função linear. Os percentis que apresentaram as correlações mais altas foram o P25 (r=-0,9; p<0,001), o P50 (r=-0,9; p<0,001) e o P75 (r=-0,9; p<0,001). CONCLUSÃO: Construiu-se um nomograma correlacionando a idade com os diferentes valores dos percentis da CFA em mulheres inférteis sem endocrinopatias. Esse apresentou um padrão linear de redução da CFA com a idade, em todos os percentis. Esse nomograma pode ser uma referência para o clínico; no entanto, uma validação futura, com dados longitudinais, ainda é necessária.

PURPOSE: To produce age-related nomograms for ovarian antral follicle count (AFC) in infertile women. METHODS: It was done a cross-sectional study of patients attended in the center of assisted reproduction Fêmina, from March 2010 to October 2011. The patients were submitted to transvaginal ultrasonography from day 2 to day 4 of their menstrual period. Patients included were between 21 to 45 years old, with regular menses, two healthy ovaries, without any evidence of endocrinopathies and who gave written informed consent. Patients excluded were smokers, with galactosemia or ovarian cysts, with antecedents of liver disease, ovarian surgeries or who were treated with chemotherapy or radiotherapy. In order to check the evolution of the AFC in relation to patient age, we used the 5th, 25th, 50th, 75th and 95th percentiles. Linear regression was carried out using these percentiles, permitting us to determine the effect of age on the CFA. RESULTS: A total of 172 patients with a mean age of 32.7 years were included in the trial. The male and tubal factors were the main causes of infertility, accounting for 65% of cases. The age-related nomogram for the 5th, 25th, 50th, 75th and 95th percentiles of AFC revealed that changes were best fitted by a linear function. The percentiles that showed the highest correlations were 25 (r=-0.9; p<0.001), 50 (r=-0.9; p<0.001) and 75 (r=-0.9; p<0.001). CONCLUSION: A nomogram was constructed correlating age with the different AFC percentiles in infertile women without endocrinopathies. This showed a linear pattern of decline in AFC with age in all percentiles. These nomograms could provide a reference guide for the clinician. However, future validation, with longitudinal data, still is needed.

Avaliação da reserva ovariana: métodos atuais / Assessment of ovarian reserve: recent methods

A avaliação do potencial reprodutivo de uma mulher traz grandes dificuldades na busca de um parâmetro fidedigno. Entre os testes disponíveis, incluem-se a biópsia ovariana, a ultrassonografia transvaginal, exames hormonais e testes com hormônios exógenos. Entretanto, nenhum deles demonstra resultados satisfatórios na investigação de pacientes inférteis. Mais recentemente, o Hormônio Antimülleriano tem sido considerado um marcador promissor dessa reserva. Esta revisão teve o objetivo de analisar cada um dos testes disponíveis, evidenciando vantagens e riscos potenciais, assim como sua real aplicabilidade na rotina ginecológica. Para isso, realizou-se uma revisão da literatura de 1998 até 2007, através do PubMed. Como resultado, observou-se que a dosagem de FSH, a contagem de folículos antrais e, principalmente, a dosagem de Hormônio Antimülleriano constituem os parâmetros mais promissores para esse objetivo. Novos estudos, entretanto, se fazem necessários para a melhor determinação desses resultados.

The assessment of a woman's reproductive potential brings difficulties in the search for a trusting parameter of this function. The tests available are ovarian biopsy, transvaginal pelvic ultrasound, hormonal parameters and tests using exogenous hormones. However, none of those shows satisfactory results for the investigation of infertile patients. Recently, Anti-Müllerian Hormone emerged as a promising marker of ovarian reserve. The objetive of this literature review is to analyse each one of the tests available, focusing in their potential advantages and risks, as well as its real applicability in gynecological practice. In order to accomplish that, articles from 1998 to 2007 were searched in PubMed. The results show that serum FSH, antral follicle count and mainly serum Anti-Müllerian Hormone are promising parameters for this aim. Other studies, however, are needed so this conclusion can be clarified.

Evidência da resposta folicular ao FSH pelo hormônio antimülleriano em mulheres ovulatórias / Evidence of follicle responsiveness to FSH by antimüllerian hormone in ovulating women

OBJETIVO: examinar a hipótese de que o nível sérico do hormônio antimülleriano (AMH) reflete a resposta dos folículos antrais à administração do FSH. MÉTODOS: estudo prospectivo, no qual foram incluídas 116 pacientes normo-ovulatórias inférteis submetidas à hiperestimulação ovariana controlada com agonista de GnRH e FSH. Depois de atingir a supressão pituitária e antes da administração de FSH (dia basal), o nível sérico de AMH foi mensurado. O número de folículos antrais foi determinado pela ultrassonografia no dia basal (folículos antrais precoces; 2 a 8 mm) e no dia da administração do hCG (dhCG; folículos pré-ovulatórios; >16 mm). A resposta folicular ao FSH foi determinada pela percentagem de folículos antrais precoces que atingiram os estágios pré-ovulatórios em resposta ao FSH (taxa de maturação). Foram estudadas as correlações do AMH com a idade das pacientes, número total de folículos antrais precoces e pré-ovulatórios, oócitos coletados, dose total de FSH na estimulação ovariana controlada e a taxa de maturação folicular. Para análise estatística, foram usados a regressão simples e o teste de Spearman's, com nível de significância de 5%. RESULTADOS: o nível sérico de AMH foi positivamente correlacionado com o número de folículos antrais precoces no dia basal (r=0,64; p<0,0001) e folículos pré-ovulatórios em dhCG (r=0,23; p=0,01). Excepcionalmente, o nível sérico de AMH foi negativamente correlacionado com a taxa de maturação (r=-0,24; p<0,008). CONCLUSÕES: o AMH atenua o desenvolvimento folicular em resposta à administração do FSH.

PURPOSE: to test the hypothesis that the anti-müllerian hormone (AMH) serum level reflects the antral follicles' response to the administration of FSH. METHODS: prospective study, including 116 normo-ovulatory infertile patients submitted to controlled ovarian hyperstimulation with GnRH and FSH agonists. The AMH serum level was measured after reaching the pituitary suppression and before the FSH administration (basal day). The number of antral follicles was determined by ultrasonography at the basal day (precocious antral follicles; 2 to 8 mm) and at the day of hCG administration (dhCG; pre-ovulatory follicles; >16 mm). The follicle response to FSH was determined by the percentage of precocious antral follicles which reached pre-ovulatory stage in response to FSH (maturation rate). The correlation of AMH with the patients' age, the total number of precocious antral and pre-ovulatory follicles, collected oocytes, total dose of FHS in the controlled ovarian stimulation and the rate of follicular maturation was studied. For the statistical analysis, it simple regression analysis and the Spearman's test were used, at a 5% significance level. RESULTS: The serum level of AMH was positively correlated with the number of precocious antral follicles at the basal day (r=0.64; p<0.0001) and pre-ovulatory follicles in dhCG (r=0.23; p=0.01). Exceptionally, the serum level of AMH was negatively correlated with the maturation ratio (r=-0.24; p<0.008). CONCLUSIONS: AMH attenuates the follicular development caused by FSH administration.

Avaliação da densidade folicular em ovários de fetos humanos / Follicular density evaluation in ovaries of human fetuses

OBJETIVO: avaliar a variação da população de folículos ovarianos ao longo do desenvolvimento fetal e acrescentar dados aos escassos, incompletos e, algumas vezes, divergentes dados descritos na literatura. MÉTODOS: doze ovários de fetos necropsiados foram estudados, sendo nove de fetos e três de neonatos. As idades dos fetos foram determinadas pela cronologia e por ultra-sonografia, enquanto os neonatos nascidos na 39ª semana de gravidez faleceram nas primeiras horas de vida. As peças foram fixadas com formaldeído e incluídas em parafina. Foram realizados cortes seriados com espessura de 7 mm e a cada 50 cortes, o material foi corado com HE e analisado com microscópio com aumento de 400 vezes. Foram contados os folículos em dez diferentes regiões do córtex ovariano, cada região com uma área de 625 mm². O número total de folículos em 1 mm³ foi calculado usando-se a fórmula: Nt=(No x St x t)/do, onde Nt é o número de folículos, No é a média de folículos observados em 1 mm², St é o total de cortes em 1 mm³ do ovário, t é a espessura do corte e do é o diâmetro médio do núcleo. RESULTADOS: a idade dos fetos variou de 24 a 39 semanas. O número de folículos por 0,25 mm² variou de 10,9 ± 4,8 em um neonato até 34,7 ± 10,6 também em um neonato. Entre os fetos, tivemos o menor valor com 36 semanas (11,1 ± 6,2) e o maior valor com 28 semanas (25,3 ± 9,6). O número de cortes observados por ovário variou de seis a 13, correspondendo à contagem de folículos em áreas que variaram de 15 a 32,5 mm². O total de folículos estimado variou de 500.000, na idade de 22 semanas, a mais de 1.000.000, na idade de 39 semanas. CONCLUSÕES: nossos resultados demonstram as diferentes densidades de folículos ovarianos durante o período gestacional, contribuindo para o escasso conhecimento existente na literatura até o momento.

PURPOSE: to determine the variation of the number of ovarian follicles during fetal life. METHODS: twelve ovaries donated for research were included in our study, nine from fetuses and three from newborn babies who died in the first hour after being delivered with 39 weeks of pregnancy. Fetal age was confirmed both by the last menstrual period of the woman and by ultrasonography. Ovaries were fixed in formaldehyde, included in paraffin and serially sliced at 7 mm. At every 50 cuts, the obtained material was haematoxilin-eosin stained and evaluated with an optical microscope (400 X). The follicles were counted in ten different regions of the ovarian cortex, each region with an area of 625 mm². The presence of a nucleus was considered the parameter for counting. Follicular density, per 1 mm³ was calculated using the formula Nt=(No x St x t)/do, where Nt is the number of follicles; No is the mean number of follicles in 1 mm²; St is the total number of slices in 1 mm³; t is the slice thickness and do is the nuclei mean diameter. RESULTS: the gestational age of fetuses ranged from 24 to 39 weeks. The number of follicles per 0.25 mm² ranged from 10.9 ± 4.8 in a newborn to 34.7 ± 10.6 in another newborn. Among the fetuses, the least value was obtained in a 36 week-old fetus (11.1 ± 6.2) and the highest in a 28 week-old fetus (25.3 ± 9.6). The total number of slices per ovary ranged from six to 13, corresponding to follicles counted in areas from 15 to 32.5 mm². The total number of follicles ranged from 500,000 at the age of 22 weeks to > 1,000,000 at the age of 39 weeks. CONCLUSIONS: our results demonstrate different (increasing) densities of ovarian follicles along the gestational period, providing more knowledge about this still not well-known subject.

Dinâmica folicular dos ovários humanos / Follicular development in human ovaries

Apesar de todo conhecimento adquirido a respeito da fisiologia ovariana, existem ainda questões que precisam ser esclarecidas. Sabemos que um número máximo de folículos ovarianos é atingido durante a vida intra-uterina e que a partir de então ocorre queda inexorável desse número até que o ovário entre em exaustão. Não compreendemos, entretanto, como o ovário controla suas reservas. A razão para isso está na dificuldade de se realizar estudos quantitativos para estimar a queda na população folicular ao longo da vida reprodutiva. Muitos autores fizeram tentativas heroicas nesse sentido, contando folículos em ovários de diferentes idades, mas, até o momento, não existe método ideal para se realizar essa contagem, e erros estão presentes em todos os estudos realizados. A partir da análise dos poucos estudos realizados, alguns autores concluíram que a taxa de depleção folicular não é constante como se acreditava, e que uma queda acentuada ocorre na última década de vida reprodutiva. Maior número de estudos mais detalhados é necessário para aumentar o conhecimento a respeito da dinâmica folicular e dos fatores que regulam o recrutamento dos folículos.

Although our knowledge concerning ovarian physiology has increased in the last 20 years, many questions are still answered. It is well established that the maximumnumber of ovarian follicles is reached during intra-uterine life and after birth in starts to decrease until menopause, when they reach complete exhaustion. It is not known, however, how the ovaries control their follicular reserve, being very difficult to perform quantitative studies in human ovaries. Several authors have tried to count ovarian follicles among different populations of ovaries from patients at different ages. Many differences were found o these studies. The initial results have demonstrated that the rate of follicular depletion is not constant and that an important decrease is found only in the last decade of the reproductive life. Therefore, more studies are needed to improve our knowledge on follicular development and recruitment.